公共场所空气中细菌总数检验方法

　　1 定义

　　撞击法(impacting method)是采用撞击式空气微生物采样器采样，通过抽气动力作用，使用空气通过狭颖或小孔而产生高整气流，使用悬浮在空气中的带菌粒子撞击到营养琼脂平板上，经37°、48h培养后，计算出每m3空气中所含的细菌菌落数的采样测定方法。

　　自然沉降法(natural sinking method)是指直径9cm的营养琼脂平板在采样点暴露15分钟，经37°、48h培养后计数生长的细菌菌落数的采样测定方法。

　　2 仪器和设备

　　2.1高压蒸汽灭菌器。

　　2.2干热灭菌器。

　　2.3恒温培养箱。

　　2.4冰箱。

　　2.5平皿(直径9cm)。

　　2.6制备培养基用一般设备：量筒，三角烧瓶，pH计或精密pH试纸等。

　　2.7撞击式空气微生物采样器。

　　3培养基

　　3.1营养琼脂培养基

　　3.1.1成分;蛋白胨

　　牛肉浸膏 10g

　　氯化钠 3g

　　琼脂 15～20g

　　蒸馏水 1000ml

　　3.1.2制法 将上述各成分混合，加热溶解，校正pH至7.4，过滤分装，121℃20min高压灭菌。用自然沉降法测定时，倾注约15ml于灭菌平皿内，制成营养琼脂平板。撞击法参照采样器使用说明制备营养琼脂平板。

　　4操作步骤

　　4.1撞击法

　　4.1.1选择有代表性的位置设置采样点。将采样器消毒，按仪器使用说明进行采样。

　　4.1.2样品采完后，将带核辐射营养琼脂平板置36±1℃恒温箱中，培养48h，计数菌落数，并根据采样器的流量和采样时间，换算成每m3空气中的菌落数，以CFU/m3报告结果。

　　4.1.3选择撞击式空气微生物采样器的基本要求。

　　(a)对空气中细菌捕获率达95%。

　　(b)操作简单，携带方便，性能稳定，便于消毒。

　　4.2自然沉降法

　　4.2.1设置采样点时，应根据现场的大小，选择有代表性的位置作为空气细菌检测的采样点。通常设置5个采样点，即室内墙角对角线交点为1采样点，该交点与四墙角连线的中点为另外4个采样点。采样高度为1.2～1.5m。采样点应远离墙壁1m以上，并避开空调、门窗等空气流通外。

　　4.2.2将营养琼脂平板置于采样点处，打开皿盖，暴露5分钟，盖上皿盖，翻转平板，置36±1℃恒温箱中，培养48h。

　　4.2.3计数每块平板上生长的菌落数，求出全部采样点的平均菌落数，以CFU/皿报告结果。